1.1.1 实验仪器 显微硬度计（上海第二光学仪器厂 MH-5）, 恒温箱（上海三腾仪器有限公司）, 电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）, 实验室pH计（上海梅特勒— 托利多仪器有限公司）, 电子显微镜（JEOL JSM-6390LV日本电气株式会社）, 高速手机（NEC日本电气株式会社）。

1.1.2 实验试剂 ①表没食子儿茶素没食子酸酯（成都曼斯特生物科技有限公司）, 实验中以表没食子儿茶素没食子酸酯为溶质, 人工唾液为溶剂, 制备成2 mg/mL的表没食子儿茶素没食子酸酯溶液。②1 mg/mL NaF 溶液。③人工致龋液（乳酸脱矿系统：0.1% mol/L乳酸, 40 g/L羧甲基纤维素, 25 mg/L制霉菌素, pH=4.0）。④再矿化溶液：含1.5 mmol/L CaCl₂、0.9 mmol/L KH₂PO₄、130 mmol/L KCl、1 mmol/L NaN₃、20 mmol/L HEPES, pH 7.0。⑤人工唾液：将0.4 g NaCl、0.4 g KCl、0.795 g CaCl₂· 2H₂O、0.78 g NaHPO₄· 2H₂O、0.005 g Na₂S· 2H₂O、1 g尿素, 以去离子水（蒸馏水）稀释至1 000 mL, pH=6.8。

1.2.1 标本的选择 取门诊因乳牙滞留拔除的上颌乳中切牙作为实验标本。要求牙齿形态正常, 釉质发育良好, 釉质无裂纹、龋损及白垩斑。将新鲜拔除的上颌乳中切牙在0.1%的新洁尔灭中浸泡24 h, 然后用超声洁牙机彻底清洗牙体表面, 在喷水冷却的状态下高速金刚砂车针去根留冠, 置于4 ℃去离子水中保存。

1.2.2 标本的制备 根据离体乳牙牙冠的大小, 制作方形模具, 用自凝塑料将牙冠舌侧包埋于模具内, 充分暴露唇面, 并使较为平坦的唇面切1/3处与模具底面平行, 并略高于自凝塑料平面。待自凝塑料凝固后, 唇面釉质用碳化硅砂纸（600目）在流水下打磨至光滑镜面, 超声清洗, 自然干燥, 釉质块唇面切1/3中间平坦处作2 mm × 2 mm的釉质开窗区, 开窗区以外区域用双层抗酸指甲油覆盖。开窗区沿牙体长轴一分为二, 两侧开窗区以外区域涂不同颜色指甲油。一侧区域用于扫描电镜观察, 另一侧区域用于检测釉质表面显微硬度。

1.2.3 基线测定 使用MH-5显微硬度计垂直载荷15 g, 持续15 s, 形成压痕, 测定釉质块基线表面显微硬度（surface microhardness, SMH）。将标本置于测试平台上, 在开窗区一侧区域中央垂直测3个点, 每个点相距100 μ m, 将3次的平均读数作为此釉质块的SMH（SMH1）。选择硬度值范围为273.6~292.7 kg/mm²釉质块30个。

1.2.4 实验分组 将30个牙釉质块按照随机数字分为3组, 实验组（表没食子儿茶素没食子酸酯组）、阳性对照组（NaF组）及空白对照组（人工唾液组）, 每组10个标本。

致龋液的试剂瓶中37 ℃恒温水浴浸泡96 h, 人工致龋液每日更换1次。脱矿完成后, 牙釉质块用大量蒸馏水洗去表面人工致龋液的残留, 在基线测量点一侧, 平行测3个点, 检测SMH值（SMH2）。每组随机选出1个标本, 用电子显微镜观察牙釉质块上早期牙釉质龋的形成。

块用蒸馏水反复清洗, 然后进行体外pH循环实验, 共循环10 d, 每天的循环包括：人工致龋液处理2 h（12：00~14：00）; 实验制剂（实验组、阳性对照组及空白对照组的实验溶液分别为2 mg/mL表没食子儿茶素没食子酸酯溶液、1 mg/mL NaF 溶液、人工唾液）处理4次（时间点为10：00、11：00、15：00与16：00）, 每次处理1 min; 其余时间标本浸泡于再矿化溶液中。每次处理后, 去离子水冲洗5 s。第10天将牙釉质块从溶液中取出, 用丙酮去除指甲油, 蒸馏水反复冲洗, 在基线测量点另一侧平行测3个点, 检测各组SMH值（SMH3）, 电子显微镜下观察釉质再矿化情况。

采用SPSS 17.0统计软件处理数据, 3组样本显微硬度均值比较采用单因素方差分析, 组间进一步两两样本间比较, 采用SNK-q检验, 各组样本脱矿处理前后的比较选用配对t检验, 检验水准为α =0.05。

脱矿处理前后各组牙釉质表面的显微硬度差异具有统计学意义（P < 0.05）, 见表1, 说明牙釉质龋的制备有效; pH循环处理后, 3组乳牙牙釉质再矿化程度不同, 差异具有统计学意义（P < 0.05）, 见表2; pH循环后釉质表面显微硬度SMH在空白对照组与实验组和阳性对照组之间差异具有统计学意义（q=41.986, P < 0.05 vs实验组; q=68.174, P < 0.05 vs阳性对照组）, 这表明表没食子儿茶素没食子酸酯和NaF均能促进乳牙釉质龋的再矿化; 实验组与阳性对照组之间差异具有统计学意义（q=26.188, P < 0.05）, 表明虽然表没食子儿茶素没食子酸酯能促进乳牙釉质龋的再矿化, 但再矿化效果低于NaF。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 3组脱矿前后的显微硬度值比较 Table 1 The SMH of enamel before and after demineralization in 3 groups x¯± s, n=10, kg/mm2 组别 SMH1 SMH2 t值 P值 实验组 282.6 ± 2.7 152.4 ± 2.4 94.779 < 0.05 阳性对照组 283.2 ± 1.8 150.7 ± 1.7 182.411 < 0.05 空白对照组 281.9 ± 3.1 151.5 ± 2.3 91.983 < 0.05 F值 0.631 1.557 P值 0.540 0.229 注 SMH1：基线显微硬度, SMH2：脱矿后显微硬度

表1 3组脱矿前后的显微硬度值比较 Table 1 The SMH of enamel before and after demineralization in 3 groups x¯± s, n=10, kg/mm2

表 2

Table 2

表 2(Table 2)

表 2 3组pH循环后显微硬度值比较 Table 2 The SMH of enamel after pH cycling in 3 groups x¯± s, n=10, kg/mm2 组别 SMH3 实验组 201.2 ± 2.81） 阳性对照组 228.4 ± 4.61）2） 空白对照组 157.6 ± 1.7 F值 1 199.975 P值 < 0.05 注 SMH3：pH循环后显微硬度, 1）：P < 0.05 vs空白对照组; 2）：P < 0.05 vs实验组。

表 2 3组pH循环后显微硬度值比较 Table 2 The SMH of enamel after pH cycling in 3 groups x¯± s, n=10, kg/mm2

经脱矿后形成的人工龋模型可见乳牙釉质表层釉柱紊乱, 釉质呈蜂窝状中心性脱矿, 釉间质溶解呈多孔性组织改变（图1a）; 再矿化处理后, 实验组釉质表面形成较为均匀、形状不规则的结晶颗粒, 直径约3~7 μ m, 微孔较少（图1b）; 阳性对照 组釉质表面有明显的致密均匀球状结晶颗粒附着, 直径约2~4 μ m, 几乎无空隙存在（图1c）; 空白对照组釉质表面极少量的沉淀区域, 由稀疏的点状或针状晶体组成, 微孔较多（图1d）。

图1

Figure 1

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	图1 离体乳牙釉质表面结构观察扫描电镜（ × 2000）Figure 1 SEM pictures of enamel surfaces （ × 2000）